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大腸桿菌宿主蛋白酶聯(lián)檢測試劑盒是用來定量分析以大腸桿菌為表達細胞 的生物藥物中宿主蛋白雜質的試劑盒。首先，用不同濃度的大腸桿菌標準蛋白制 作一條標準曲線，然后再根據(jù)標準曲線來分析生物藥物中宿主細胞殘留蛋白的含 量。具體方法為：先將大腸桿菌標準蛋白或者待測樣品適當稀釋后加入已包被好 抗大腸桿菌宿主蛋白抗體的96孔平板中。經(jīng)過1.5小時的保溫，宿主細胞蛋白與 已經(jīng)固定在平板上的抗體結合形成抗原－抗體復合物。此復合物被隨后加入的生 物素標記的抗大腸桿菌宿主蛋白的抗體結合并進一步形成更高級的復合物，反應 45分鐘后洗去未結合的物質。再加入鏈霉親合素-辣根過氧化物酶復合物，靜置 30分鐘。因鏈霉親合素可以與任何帶生物素標記的抗體相結合，從而使鏈霉親合 素-辣根過氧化物酶復合物連接到平板上。接下來沖洗掉未結合的物質，加入TMB 底物。固相上的酶催化底物產(chǎn)生顏色反應，待顏色反應一段時間后，終止反應。 用酶標儀在450 nm波長下測定其結果，此結果能間接地反應結合到平板上的的宿 主細胞蛋白數(shù)量的多少。根據(jù)大腸桿菌宿主蛋白標準曲定量分析生物藥物中宿主 細胞殘留蛋白的含量。